genebridges K006說(shuō)明書

Quick & Easy E. coli Gene Deletion Kit

gene bridges快速簡(jiǎn)便的大腸桿菌基因刪除試劑盒

細(xì)節(jié)：

特征

• Red / ET的忠實(shí)重組

• 快速

• 可能有多個(gè)淘汰賽

• 方便地去除重組質(zhì)粒

應(yīng)用

該試劑盒旨在在不到一周的時(shí)間內(nèi)敲除或改變大腸桿菌染色體上的基因。

描述

紅色/ ET重組使堿基對(duì)可以，特異性和忠實(shí)的方式交換遺傳信息。試劑盒隨附有FRT側(cè)翼的卡那霉素抗性標(biāo)記盒，可用于替換大腸桿菌染色體上的基因。Red / ET重組可替代大腸桿菌染色體上長(zhǎng)達(dá)30kb的片段。如果需要，使用FRT側(cè)翼抗性盒替代目標(biāo)基因可以隨后通過(guò)FLP重組酶步驟去除選擇標(biāo)記。FLP表達(dá)質(zhì)粒可以從Gene Bridges購(gòu)買。重復(fù)插入試劑盒隨附的功能盒或與Gene Bridges提供的其他功能盒組合可產(chǎn)生多個(gè)基因敲除。重組過(guò)程由于pRed / ET表達(dá)質(zhì)粒的優(yōu)化設(shè)計(jì)而受到嚴(yán)格控制。重組蛋白的基因在誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的控制下，質(zhì)粒帶有溫度敏感的復(fù)制起點(diǎn)，可在重組后方便地除去質(zhì)粒。

內(nèi)容

• 兩個(gè)Red / ET重組蛋白表達(dá)質(zhì)粒pRed / ET（tet）和pRed / ET（amp）。通過(guò)用這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，可將任何大腸桿菌菌株制成Red / ET精通的

• FRT位于卡那霉素抗性模板的側(cè)面（FRT-PGK-gb2-neo-FRT），可用于您自己的實(shí)驗(yàn)。

• 陽(yáng)性對(duì)照，用于替換大腸桿菌染色體上的甘露糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（man X）基因。

• 詳細(xì)的協(xié)議，質(zhì)粒，圖譜和序列的描述

序列

FRT-PGK-GB2-NEO-FRT

FRT  啟動(dòng)子neo ^R 終止子   

AATTAACCCTCACTAAAGGGCGGCCGC GAAGTTCCTATTCTCTAGAAAGTATAGG AACTTC ATTCTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGC GCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCA CACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTT CGCGCCACCTTCCACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTC GCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGA TGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATA GCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGG GGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAG GCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTC CTCATCTCCGGGCCTTTCGACCTGCAGCAGCACGTGTTGACAATTAATCATCGGC ATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACAAGGTGAGGAACTAAACCATGGGATCG GCCATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGC TATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACGATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTT CCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGT GCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGG GCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCT GCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCC GAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGG CTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCG GATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTC GCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATC TCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCG CTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGAC ATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACC GCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTA TCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAGCGGGACTCTGGGGTTCGAATAAAGACCGA CCAAGCGACGTCTGAGAGCTCCCTGGCGAATTCGGTACCAATAAAAGAGCTTTAT TTTCATGATCTGTGTGTTTGTTTTTGTGTGCGGCGCG GAAGTTCCTATTCTCTAG AAAGTATAGGAACTTCCTCGAGCCCTATAGTGAGTCGTATTA